Yeni Bir Türk Bitkisel Preparatın Huvec Üzerindeki Etkisinin İn Vitro Olarak Moleküler Düzeyde Araştırılması ve Fenolik Bileşen Analizi

Abstract

Giriş ve Amaç: Bitkisel ilaçlar geleneksel halk tıbbında uzun yıllardır kullanılmaktadır. Bu çalışmada, halk tıbbında anti-trombotik olarak kullanılan yeni bir Türk bitkisel preparatın (TBP) HUVEC üzerindeki etkilerinin in vitro hücre testleri ve proteomik analizlerle araştırılması ve fenolik bileşen analizinin yapılması amaçlanmıştır. Materyal ve Yöntem: Farklı bitkilerin kısımlarından (Türk yeşil çay yaprağı, tarçın kabuğu, nane, kekik, çörek otu gibi) elde edilen TBP etanolik ekstresi yarı yarıya seyreltilerek HUVEC’lere belirli sürelerde uygulanmıştır. Daha sonra hücrelerden protein izolasyonu yapılarak proteomik analizler gerçekleştirilmiştir. Kontrol ve uygulama gruplarının protein profilleri 2D-PAGE ile karşılaştırılmış, belirlenen protein kümelerindeki proteinler kütle spektrometresi ve biyoinformatik analizler ile tanımlanmıştır. MTT testi ile sitotoksisite değerlendirilmiş ve VEGF’yi hedef alan immünohistokimyasal boyama yapılmıştır. Ayrıca seçilmiş standartlar kullanılarak HPLC ile fenolik bileşen analizi yapılmıştır. Bulgular ve Sonuç: Proteomik analiz ile “calcium-independent phospholipase A2-gamma”, “SH2B adapter protein 1”, “mitochondrial uncoupling protein 2”, ve “hyaluronan and proteoglycan link protein 4” proteinleri tanımlanmıştır. Bu proteinler kontrol ve uygulama grupları arasında farklılık göstermektedir. Ayrıca immünohistokimyasal boyama sonuçlarına göre VEGF ifadesi de gruplar arasında farklılık göstermiştir. HPLC analizi, ekstrenin syringik asit, klorojenik asit gibi fenolik asitleri içerebileceğini göstermiştir ancak miktarları düşüktür.Tanımlanan proteinlerin hemostaz ve tromboz ile ilişkili olduğu bulunmuştur. Bu proteinlerin ifadesindeki değişimler, TBP’nin etki mekanizmasına katkı sağlıyor olabilir. VEGF’nin de benzer şekilde venöz tromboz ile etkileşimde olduğu bilinmektedir. Ekstre, fenolik bileşenler dışında başka maddeler de içerebilir ve etkisinde de büyük olasılıkla içerdiği tüm bileşenlerin sinerjistik etkileri rol oynamaktadır. Kapsamlı in vitro ve in vivo çalışmalar ile halk tıbbında kullanılan preparatın etkileri ve içeriği daha detaylı bir şekilde ortaya koyulabilecektir.